关键词：免疫组织化学；组织化学；双重染色；天狼猩红染色
免疫组织化学染色技术作为病理诊断的一种常规技术手段，在病理科疑难疾病的诊断过程中发挥着重要作用。但是在某种程度上，单一的免疫组织化学染色降低了病理诊断和实验结果的可信度，代写毕业论文必要时进行免疫组织化学和组织化学双重染色可以帮助确诊。我们在实践中摸索了免疫组织化学和天狼猩红双重染色方法，染色效果较为满意。
1 材料与方法
1．1 材料和试剂
常规梯度脱蜡、脱水试剂，免疫组织化学试剂盒。载玻片、盖玻片。自行制备天狼猩红染色剂和酸化水。
1．2 双重染色方法
选择结肠癌组织，制备石蜡切片，60℃ ～65℃ 的烤箱中烘烤12 h以上。使用前再次烘烤，将加热的组织切片直接进入二甲苯溶液脱蜡。乙醇梯度脱水，3％H 02灭活内源性过氧化物酶的活性，专用微波炉进行抗原热修复，按SP法作免疫组织化学流程染色。DAB显色，显微镜下观察，蒸馏水终止染色。将免疫组织化学染色后的组织切片直接从终止的蒸馏水中取出，苏木素重染细胞核20 min，盐酸酒精分化，流水返蓝约10 rain。浸入苦味酸天狼猩红液1 h左右，染色时间的长短取决于试剂配置时间的长短和周围环境的温度，此外，周围环境温度高，染色时间也需要适当缩短，反之则需要适当延长。此步染色时间的掌握比较重要，着色过浅也影响细胞形态学的观察和实验结果。然后入酸化水浸洗2次(时间不宜过长)[1，2]滤纸吸净多余水分，梯度酒精脱水，无水酒精30 min以上，二甲苯透明， 中性树胶封固，盖玻片使用1％盐酸酒精处理。
2 结果
免疫组织化学染色和组织化学双重染色染色结果显示：通过免疫组织化学染色肿瘤细胞被染成棕黄色，在偏振光显微镜下观察可见天狼猩红染液将I型胶原染为粉红色，Ⅲ型胶原染为绿色，通过双重染色可以清晰的观察到肿瘤细胞和胶原纤维的形态特点以及彼此之间的结构关系，肿瘤细胞侵犯间叶组织，肿瘤细胞同胶原蛋白交互排列(图1，见封四)。
3 讨论
在组织切片上进行双重染色拓宽了组织切片技术的使用范围。同时及时、正确的病理诊断对于疾病的治疗、患者能否顺利康复、减少不必要的误诊意义重大。在病理科日常的工作中，时常会遇到一些难以确切诊断的病例。此时免疫组织化学染色结果可以很好提示我们病变组织的来源，但是单一的免疫组织化学有时不能提供充分的信息，尤其是在良、恶性肿瘤的诊断中，通过单一染色方法有时不能对肿瘤细胞和间叶组织的相互关系进行清楚了解[3，4]利用双重染色技术可以明确肿瘤细胞和间叶组织之间的结构关系[5]，有助于作出正确的病理诊断。
【参考文献】
[1]刘剑毅，李世荣，纪淑兴，等．病理性瘢痕中胶原纤维形态和结缔组织生长因子表达的检测[J]．第三军医大学学报，2003，25 (9)：818—821．
[2]许崧杰，赵黎，王海强，等．肢体延长中张应力对肌间结缔组织显微结构的影响[J]．中国临床康复，2003，7(8)：1238— 1239．
[3]阮幼冰，官阳．大鼠肝内移植肿瘤与肥大细胞关系的形态学研究[J]．临床与实验病理学杂志，2002，18(4)：393—396．
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